1、基因表达载体构建时，靶基因前序列移码　　半保留复制是一种DNA的复制模型，其中亲代双链分离后，每条单链均作为新链合成的模板。

2、因此，复制完成时将有两个子代DNA分子，每个分子的核苷酸序列均与亲代分子相同。

(资料图)

3、子代DNA分子中，一条链来自亲代，另一条链为新合成的链。

4、所以，新生成的链和原先的模板链是一摸一样的，所以新的链上也是有标记基因的。

5、　　在构建基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。

6、　　基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。

7、其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。

8、　　过程：　　首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。

9、然后用同　　一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。

10、将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键，再加入适量DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。

11、如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合，形成重组DNA分子（也叫重组质粒）的。

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